链霉亲和素 (SA)

链霉亲和素 (Tetramer streptavidin,SA, tSA)


制品名称野生型链霉亲和素(Tetramer Streptavidin,简称TSA)
制品编号TSA-01001, TSA-01005, TSA-01010, TSA-01100, TSA-01103
制品规格1 mg, 5mg,10 mg, 100 mg,500mg,1g
制品形式冻干粉
分子大小60 kDa
制品来源大肠杆菌发酵工程菌株
【制品纯度≥95%
制品活性≥15 U/mg 蛋白(Green 改良法测定)
保存条件-20℃保存
有效期限3 年
制品概述

链霉亲和素(SA是阿维丁链霉菌(Streptomyces avidinii)分泌的一种同型四聚体蛋白。与生物素具有很高的亲和力,本制品为127AA最佳核心结构, 每分子SA 结合4 个生物素分子,国际比活性12-15 U/mgSA 与禽类亲和素(AvidinAV)相比特异性更强,与生物素结合后半衰期长达6 小时,而AV 半衰期仅为1 小时。由于SA 不含糖基且等电点接近于中性,因此SA 在检测应用中具有比AV 更低的非特异性背景。


制品用途

本制品已广泛应用于包被免疫检测用微孔板,制备SA偶联酶制剂(如SA-HRP、SA-AP 等),SA偶联荧光素(即荧光染料,如SA-FITC,SA-Cy2,SA-Cy3 等)、SA偶联磁珠等,进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验,免疫组化化学、亲和色谱填料制备、含StrepTagⅡ标签(8-AA 寡肽)的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、 预靶向制药研究和生物芯片被料等生物技术领域。


制品特色高吸附能力、高亲和力, 高偶联效率。


注意事项

1、冻干粉溶解后应避免反复冻融,建议分装成小包装后分别冻存;

2、溶解后立即使用效果最好,不能4°C长期存放;
3、冻干粉中含20mM Na2CO3 pH9.5 的缓冲体系,若用于包被,酶标可以直接使用;

4、若用于ELISA或CLIA固相载体包板和硝酸纤维素膜划线包被,需要烘干保存的,包被液

或缓冲液中需加入20%蔗糖作为活性保护剂。


操作步骤简述

一、微孔板包被

1、用碳酸钠缓冲溶液(pH 9.6)溶解冻干粉,将浓度稀释成3-10ug/ml(客户可设定梯度进行实验)

注意:由于SA等电点是7.4,包被不建议使用中性缓冲液

2、用移液器吸取100ul/孔,4℃过夜包被或者37℃包被2h;

3、洗涤:倒尽板孔中液体,加200ul洗涤液,静放三分钟,反复三次,最后将反应板倒置在吸水纸上,使孔中洗涤液流尽,扣干

4、后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程

若不立即进入下游实验,包被板需要进行烘干保存时。包被前,将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。


二、SA偶联磁珠

2.1 NHS 活化
1、充分混匀磁珠后,取100μl PangoBeads COOH 磁珠到1.5 ml 离心管中,置于磁性分离上,待固液分离后去除上清液;
2、取200μl MES溶液(25mM,pH 5.0)加入到离心管中,置于磁性分离上,待固液分离后去除上清液。重复该步骤1 次;
3、迅速加入新配制的50μl EDC 溶液和50μl NHS 溶液 (均为50mg/ml, 以上述MES 配制)到装有磁珠的离心管中,漩涡混匀使磁珠充分悬浮,室温下垂直混合30min;
4、反应结束后,加入100μl 上述 MES 溶液洗涤 2 次;(活化状态不宜长时间保存,
建议立即进行偶联)


2.2 蛋白偶联
1、将离心管置于磁性上,分离去除上清液,加入100μl蛋白溶液(25 mM MES,pH 5.0)
轻柔地混匀;(蛋白浓度在0.1-2.0mg/ml)
2、在室温下垂直混合反应2h,或在4℃条件下垂直混合过夜;
3、反应结束后将离心管置于磁分离架上,磁性分离去除上清液,加入1ml乙醇胺溶液
(3M,pH9.0)洗涤磁珠 2 次;
4、加1ml乙醇胺溶液(3M, pH 9.0)于离心管中,涡旋30s,将离心管置于垂直混合
仪中室温反应1-2h;
5、反应结束后,将离心管置于磁力架上,待固液分离后移除上清液,然后加入100μl
纯化水轻柔涡旋 30s,磁吸分离,重复该步骤 1 次;
6、加入适量的保存液(可根据需要来确定保存溶液的加入量,以调整偶联配体磁珠的加入适量的保存液(可根据需要来确定保存溶液的加入量,以调整偶联配体磁珠的浓度)保存于4°,如果固定的生物配体稳定,可以在保存溶液中加入0.02%(W/V)叠氮化钠作为抑菌剂。



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